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31.
PCR方法检测2型猪链球菌2种毒力因子 总被引:21,自引:4,他引:21
根据 2型猪链球菌毒力因子溶菌酶释放蛋白 (MRP)与细胞外蛋白因子 (EF)基因 (mrp与 epf)序列 ,分别设计、合成一对引物 ,建立聚合酶链反应 (PCR)方法。该方法扩增出 2型菌株的 mrp大小为 885 bp,epf为 62 6bp,而对马链球菌兽疫亚种 (C群 )、猪丹毒杆菌、猪肺疫巴氏杆菌、猪肺炎霉形体等 PCR均未扩增出任何条带。用 Xba 和 H ae 分别酶切 PCR扩增产物 ,均获得与预计一致的酶切图谱 ,PCR扩增产物测序结果显示 :其基因序列分别与 Gen Bank上公布的mrp全基因第 5 0 0~ 1 3 1 5位碱基及 epf全基因第 2 441~ 3 0 2 8碱基对一致。PCR检测的敏感度可达 1 0 0个细菌。用建立的 PCR对从病猪体内分离的菌株进行检测 ,检测的 1 5株 2型分离株中有 1 3株 mrp与 epf均为阳性 ,为典型的高毒力表现型菌株 (mrp epf ) ,1株为 mrp epf- ,1株为 mrp- epf- 。 相似文献
32.
用斑马鱼检测猪链球菌2型的致病力 总被引:7,自引:0,他引:7
【目的】猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)菌株致病力各异,以斑马鱼为实验动物,建立了较为简便可靠的SS2致病力检测方法。【方法】选用1 005尾AB系斑马鱼(Danio rerio)以检测SS2不同分离株的致病力。检测8株基因型均为mrp+ef+、对猪有致病力的SS2菌株。【结果】结果斑马鱼接种菌株12 h后呈败血症病变,96 h内对斑马鱼的半数致死量(LD50)在5.36×103至5.01×104 cfu之间。上述接种菌株的斑马鱼均从体内重新分离到接种菌。同时检测1株基因型为mrp-ef-、对猪无致病力的SS2菌株,斑马鱼接种后96 h内不表现任何病变,亦不出现死亡,对斑马鱼的LD50>106 cfu。SS2有毒力株和无毒力株对斑马鱼的LD50差异极显著(P<0.01)。【结论】斑马鱼可作为研究猪链球菌2型菌株感染的动物模型。 相似文献
33.
34.
为了解血清2型猪链球菌(S.suis2)河南分离株的毒力基因型及cps2j全基因突变情况,本研究扩增S.suis2毒力基因gdh、cps2j、mrp、ef 、sly、orf2和fbps,并对s.suis2的cps2j进行全基因序列测定和同源性分析.结果表明,gdh、cps2j、mrp、ef、sly、orf2和fbps基因在8个S.suis2分离株中的检出率分别为100%(8/8)、100%(8/8)、62.5%(5/8)、75%(6/8)、87.5%(7/8)、100%(8/8)和100%(8/8);其中cps2j全基因核苷酸及推导的氨基酸序列与来源不同的S.suis2分离株同源性分别达98%和97%以上,以该基因构建的系统发育树表明8株S.suis2河南分离株与国内外不同参考株同源性高,亲缘关系密切. 相似文献
35.
猪链球菌2型纤连蛋白/血纤蛋白原结合蛋白
全基因的克隆及融合表达 总被引:4,自引:0,他引:4
采用发表的引物对,以猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2)江苏分离株HA9801的基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增纤连蛋白/血纤蛋白原结合蛋白基因fbps(GenBank登录号为AY565303)克隆于pMD-T18载体构建成载体pMD-T-fbps.经内切酶酶切和测序鉴定后,将由pMD-T-fbps内切酶切下的片段定向克隆于表达载体pET-32a(+),得到重组质粒pfbps.将重组质粒pfbps转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21株,经IPTG诱导,可高水平地表达相对分子量为83 kD的融合蛋白.配体印迹结合试验表明,表达的融合蛋白可与人纤连蛋白结合. 相似文献
36.
猪链球菌2型JX分离株的生物学特性 总被引:2,自引:0,他引:2
从临床表现为脑膜炎、关节炎及败血症的发病猪分离到2株细菌,分别命名为JX02和JX03,经鉴定其形态、染色及培养特性均符合链球菌的特点,具α或β溶血,生化试验结果不稳定。用猪链球菌2型、1型和9型抗血清进行凝集试验,结果2株菌均能与猪链球2型抗血清凝集,其中1株菌对小鼠和家兔均有致病性,另1株菌只能致死家兔。PCR均能扩增2株菌的主要毒力因子基因。表明发病猪的病原不同于以往的C群链球菌,不是马链球菌兽疫亚种,而是属于R群的猪链球菌。 相似文献
37.
Defensin is a small cationic peptide widely distributed in animals and plants. It is an important component of the innate immune defense system of mammals. It has a broad spectrum of antibacterial, antiviral and antifungal activities. Porcine β-defensin-2 (PBD-2) is one of the natural defensins expressed in pigs and has good antibacterial activity in vitro. The purpose of this study is to evaluate the therapeutic effect of PBD-2 in the treatment of Streptococcus suis infection in animals and to provide more insights for evaluating the value of PBD-2 as a therapeutic drug. Firstly, the bactericidal activity of PBD-2 against S. suis clinical isolate SC-19 was measured in vitro, and the cytotoxicity of PBD-2 was tested on mouse-derived macrophages (RAW264.7). Subsequently, C57 female mice aged 4-6 weeks and weighing between 18-22 g infected with S. suis SC-19 were treated with PBD-2 or PBS (n ≥ 6). The survival rate of mice, and the bacteria loads, inflammatory cytokine levels, and pathological changes of tissues were determined. The results showed that PBD-2 (25-200 μg·mL-1) could significantly inhibit the growth of S. suis SC-19 in a concentration-dependent manner (P<0.05). At the same time, PBD-2 had no significant toxic effect on RAW cells (P>0.05). The in vivo study revealed that PBD-2 treatment could effectively reduce the mortality of mice infected with S. suis SC-19. At the same time, PBD-2 treatment significantly reduced bacteria loads in brain, lung, spleen and blood of mice, and decreased the levels of inflammatory cytokines IL-6, IL-12 and TNF-α in mouse sera (P<0.05). At the same time, PBD-2 treatment also significantly alleviated the degree of pathological damages in lung and spleen tissues of mice infected with bacteria (P<0.05). These results indicate that PBD-2 confers great resilience to S. suis in vitro without significant cytotoxicity, while it also exhibits a therapeutic effect on S. suis infection in mice, suggesting that the use of PBD-2 as a therapeutic drug and substitutes for antibiotics is of an excellent prospect. 相似文献
38.
从山东地区32个猪场发生多发性关节炎的仔猪体内分离到15株病原菌。通过对分离菌株的形态染色、分离培养、生化试验及种特异性基因的PCR扩增等方法鉴定菌株,结果显示4株分离菌株为副猪嗜血杆菌,7株为猪链球菌,2株为化脓隐秘杆菌,1株为猪胸膜肺炎放线杆菌,1株为猪丹毒杆菌。15株分离菌均对昆明小鼠有较强的致病力,且对先锋霉素类抗生素高度敏感,大多数菌株还对青霉素类、头孢菌素Ⅲ类、氟喹诺酮类、万古霉素、壮观霉素等抗生素高度敏感。该试验表明山东地区猪场仔猪多发性关节炎的病原菌主要是副猪嗜血杆菌和猪链球菌,可交替使用上述敏感抗生素防治该病。 相似文献
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